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发布时间：2020-04-03 17:05所属平台：学报论文发表咨询网浏览： 次
摘要：目的对比长白山地区龙胆、条叶龙胆、三花龙胆质量，对其进行质量评价。方法建立龙胆药材指纹图谱。另建立一标多测方法(QAMS)，以龙胆苦苷为参照，计算獐牙菜苦苷、当药苷的相对校正因子，检验方法的可行性并计算含量，对经一标多测方法计算得到的各成
摘要：目的对比长白山地区龙胆、条叶龙胆、三花龙胆质量，对其进行质量评价。方法建立龙胆药材指纹图谱。另建立一标多测方法(QAMS)，以龙胆苦苷为参照，计算獐牙菜苦苷、当药苷的相对校正因子，检验方法的可行性并计算含量，对经一标多测方法计算得到的各成分含量与通过外标法测得的实际含量进行对比，并对测定结果进行单因素方差分析。结果建立龙胆药材指纹图谱，共13个共有峰，其中3个峰为龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和当药苷，24批龙胆药材相似度均>0.95。2种方法计算得到各成分的含量无显著差异。龙胆、条叶龙胆中龙胆苦苷和当药苷含量高于三花龙胆，獐牙菜苦苷含量无显著差异。结论指纹图谱结合一标多测方法经过实际验证，有较高准确性和可行性，可用于龙胆质量评价。综合评价，龙胆、条叶龙胆质量优于三花龙胆。
关键词：指纹图谱;一标多测;质量;龙胆
《中国药典》收载中药龙胆为龙胆科植物龙胆GentianascabraBge.、条叶龙胆GentianamanshuricaKitag.、三花龙胆GentianatrifloraPall.或坚龙胆GentianarigescensFranch.的干燥根和根茎[1]。本实验以长白山地区产、三种药典收载来源的龙胆为研究对象，采用一标多测方法，以龙胆苦苷为参照，计算相对校正因子，实现测定龙胆苦苷含量的同时测定獐牙菜苦苷和当药苷含量[2-3]。另外建立龙胆药材的指纹图谱，将指纹图谱和一标多测方法结合，前者定性，后者定量，2种方法同时使用，对长白山地区龙胆、三花龙胆、条叶龙胆资源进行质量评价，优选龙胆药材来源。
1仪器与试药
1.1仪器
PM-1000日立高效液相色谱仪(日立仪器有限公司);Agilent1260高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);AgilentXDB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);InertsilODS-3柱(250mm×4.6mm,5μm);AmethystC18-H(250mm×4.6mm,5μm);PTX-FA110S电子天平(福州华志科学仪器有限公司);BT25S电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);YM-100S超声波清洗机(深圳市语盟超声波清洗机设备厂);Medium-s300和泰实验室纯水系统(上海和泰仪器有限公司)。
1.2试药
龙胆苦苷(批号：110770-201013)、当药苷(批号：111742-200501)购于中国药品生物制品检定所;獐牙菜苦苷(批号：110785-201404)购于中国食品药品检定研究院;甲醇为分析纯(北京化工厂)、色谱纯(FisherChemical);水为超纯水。龙胆分别来自长白山地区，见表1，共计24批次，经长春中医药大学张天柱副教授鉴定分别为龙胆科植物龙胆GentianascabraBge.、条叶龙胆GentianamanshuricaKitag.、三花龙胆GentianatrifloraPall.的干燥根及根茎。
2方法与结果
2.1色谱条件
PM-1000日立高效液相色谱仪;色谱柱AgilentXDB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇(A)：水(B)，洗脱程序为：0～20min，20%A，20～80min，25%～75%A，80～90min，100%A，90～100min，20%A;流速为0.8mL/min;柱温为35℃;检测波长为243nm;进样量为10μL。2.2混合对照品溶液的制备取一定量龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷对照品置于20mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制备三对照品成浓度分别为1.201、0.074、0.014mg/mL的混合对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
取批次1龙胆适量，粉碎，过4号筛，取约0.5g，精密称定，置20mL容量瓶中，加50%甲醇约18mL，超声(功率250W，频率20kHz)30min，取出，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。
2.4方法学考察
2.4.1线性关系
取“2.2”混合对照品溶液，分别进样4、8、12、16、20、24μL，测定峰面积。以进样体积、峰面积为横、纵坐标，绘制标准曲线。结果表明在一定范围内，龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷线性良好，见表2。2.4.2重复性在同一样品中平行取6份样品，按“2.3”方法制备供试品溶液，按“2.1”方法测定。测定结果为，龙胆苦苷含量平均为4.788%，獐牙菜苦苷平均含量为0.286%，当药苷平均含量为0.051%，RSD分别为0.09%、0.02%、0.02%，方法重复性良好。
2.4.3稳定性
取同一供试品溶液，按“2.1”方法在0、4、8、12、16、20、24h分别测定，记录峰面积，龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷色谱峰面积RSD分别为0.51%、1.54%、1.41%，供试品溶液24h内稳定性良好。
2.4.4精密度
取同一供试品溶液，按“2.1”方法连续进样测定6次，龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷色谱峰面积RSD分别为0.23%、0.83%、0.78%，仪器精密度良好。
2.4.5加样回收率
取龙胆粉末样品(已知成分含量)6份，约0.5g，精密称定，以“2.2”已配制对照品溶液按“2.3”方法制备供试品溶液6份，按“2.1”条件测定，记录峰面积，计算含量及回收率。结果3种成分回收率依次为99.93%、104.80%、102.08%，RSD分别为1.09%、1.81%、2.24%。回收率在95.0%～105.0%之间，RSD均小于3.0%，该方法回收率较好。
2.5指纹图谱
2.5.1龙胆药材指纹图谱的建立
取24批龙胆药材粉末(过4号筛)，按“2.2”“2.3”方法制备混合对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”色谱条件测定，得到色谱图。比较24批龙胆的色谱图，标记其中13个色谱峰为共有峰，再与混合对照品色谱图相比较，确认13个共有特征峰中，3号峰为獐牙菜苦苷，5号峰为龙胆苦苷，6号峰为当药苷。以5号峰龙胆苦苷为参照峰(S)，计算各共有峰的相对保留时间及其RSD。结果表明各个共有峰相对保留时间较稳定、无明显差异。
2.5.2指纹图谱相似度评价
将“2.5.1”所得的24批龙胆的高效液相指纹图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”，设S1为参照图谱，色谱峰匹配选择中位数法，时间窗宽度设为0.1min，进行多点校正、全谱峰匹配，得到24批样品图谱及对照图谱。对样品进行相似度评价，皆>0.95，说明各批次龙胆样品间一致性较好。
2.6QAMS
2.6.1相对校正因子
以龙胆苦苷为参照，计算獐牙菜苦苷、当药苷的相对校正因子。
2.6.2相对校正因子重复性考察
对不同品牌高效液相色谱系统和液相色谱柱进行考察，分别为PM-1000日立高效液相色谱仪;Agilent1260高效液相色谱仪;AgilentXDB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);InertsilODS-3柱(250mm×4.6mm,5μm);AmethystC18-H(250mm×4.6mm,5μm)。结果表明，使用不同的高效液相色谱仪或色谱柱，相对校正因子重复性较好。
2.7样品测定及方法比较
取“2.2”对照品溶液及24批样品按“2.3”方法制备的供试品溶液，使用一标多测方法及外标法分别计算、测定样品中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷含量，对结果进行比较。结果表明，一标多测方法和外标法计算各成分含量相对偏差均<3%，2者无显著差异。对计算结果进行统计，龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷含量均值为4.99%、0.28%、0.02%，条叶龙胆含量均值分别为5.01%、0.27%、0.02%，三花龙胆含量均值为3.75%、0.25%、0.01%。对不同龙胆成分含量进行单因素方差分析，在3种龙胆间，獐牙菜苦苷无显著差异(P>0.05)，龙胆苦苷、当药苷有显著差异(P<0.05)，结合含量均值比较，龙胆和条叶龙胆质量相对较好。
3讨论
本实验在药典基础上，对龙胆药材的提取溶剂、提取方法进行优化。提取溶剂考察100%甲醇、70%甲醇、50%甲醇，其余条件相同情况下，结果显示50%甲醇提取效果较好且节约成本，故选择提取溶剂为50%甲醇。提取方法方面分别考察加热回流15min、超声提取(功率250W，频率20kHz)30、45、60min，比较3个成分的含量，结果较为相近，由于超声提取法简单易行，故选择超声提取30min。
另外对色谱条件，包括检测波长、洗脱程序等进行优化。经过紫外吸收波长检测，待测3种成分中，龙胆苦苷最大吸收波长为270nm，獐牙菜苦苷为236nm，当药苷为243nm，为平衡各成分和出现色谱峰数量合适，尽量选择居中波长，故选择波长为243nm。流动相在《中国药典》甲醇-水(25:75)的基础上，根据出峰时间、分离度、峰形等进行调节，最终确定洗脱程序为0～20min，20%A，20～80min，25%～75%A，80～90min，100%A，90～100min，20%A，可使3个成分较好分离，利于计算[4-6]。
目前应用的质量控制方法主要为规定单一成分含量、规定多成分含量或指纹图谱(或特征图谱)，但目前来看，这3种方法都存在一定短板：龙胆含化学成分复杂，药效物质不止1种，很难以单一成分含量描述和确定药材质量;规定多成分含量相对规定单一成分含量有一定进步，但由于龙胆化学成分复杂，各物质成分可能在特定环境条件下发生反应，造成成分的消失生成，不可控因素较多，且以上两法需要相对较多的化学对照品，成本相对较高，又可能遇到缺少相应对照品的情况;指纹图谱主要用于根据共有峰鉴定品种，具有特征性、系统性和重现性。
本实验将指纹图谱与一标多测方法相结合，既可根据指纹图谱相似度确定药材原植物品种，也可在对照品缺乏的情况下以1种成分含量确定其他成分含量，方法重复性好，有一定专属性[7-8]。龙胆作为常用中药材，需求量大，野生龙胆资源已无法满足市场需求，所以近年来市场流通的龙胆药材多为栽培品。目前长白山地区内，栽培龙胆、条叶龙胆较多，三花龙胆较少。由实验结果看出，以有效成分含量为指标评价，龙胆和条叶龙胆质量较好。但是，龙胆的质量优劣不仅取决于有效成分质量，也取决于性状等。且龙胆在大规模种植的过程中，种植地域、生长环境等因素也有不同，采收加工时也无统一规定，导致龙胆药材质量参差不齐[9-10]。以此为基础，再经饮片加工过程，导致成品饮片质量差异大，直接影响药效。因此本实验对药材不同基源进行对比，可为下一步环境因素对龙胆资源质量影响等研究打下基础，也为龙胆资源质量研究及进一步开发利用提供科学依据。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:96.
[2]李翟,姜大成,翁丽丽,等.一测多评法同时测定龙胆不同部位中3个环烯醚萜苷类成分的含量[J].药物分析杂志,2019(6):1069-1076.
[3]段吉平,冯丽,刘永利,等.一测多评法测定当药中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和当药苷的含量[J].中药材,2014(4):624-626.
[4]吕新,孙建之,徐士钊,等.HPLC法同时测定不同产地龙胆酒炙前后3种环烯醚萜苷[J].中成药,2019,41(5):1106-1109
中医药方向论文范文：中药材当归在高寒地区的丰产栽培技术
摘要:本文对当归的生长习性进行了具体的介绍，同时从育苗地处理、品种选择及种苗处理、土壤处理及施肥量、种苗选择、种苗处理、栽培方式、田间管理、病虫害防治以及采收几个方面介绍了当归在高寒地区的丰产栽培技术，希望能够为种植户提供参考，从而促进我国当归种植产业的健康稳定发展。
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《长白山地区龙胆资源质量评价》