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发布时间：2021-04-06 16:36所属平台：学报论文发表咨询网浏览： 次
摘要野菊花为常见中药材，广泛运用于中成药和日化产品，目前主要依赖于野生资源，人工栽培较少。为探究野菊花的适宜生产区域，明确影响野菊花指标成分积累的气候因子，本研究对不同产地野菊花中蒙花苷含量与气候因子进行灰色关联度和Pearson相关分析。研究表
摘要野菊花为常见中药材，广泛运用于中成药和日化产品，目前主要依赖于野生资源，人工栽培较少。为探究野菊花的适宜生产区域，明确影响野菊花指标成分积累的气候因子，本研究对不同产地野菊花中蒙花苷含量与气候因子进行灰色关联度和Pearson相关分析。研究表明不同产地间野菊花蒙花苷含量差异显著，安徽、河南、湖北三省交界的大别山区域的野菊花蒙花苷含量相对较高，而山西、陕西两省大多数产地野菊花蒙花苷含量均较低;各因子与蒙花苷含量的灰色关联度大小依次是年均降水量>年均日照时数>年均气温>经度>全年无霜期>纬度>海拔。经度、年均气温、年均降水量与野菊花中蒙花苷含量呈显著正相关关系，纬度和海拔则相反，全年无霜期及年均日照时数与野菊花蒙花苷积累没有显著相关性。在调查区域内不同产地野菊花蒙花苷含量差异显著，高经度、低纬度、低海拔、高年均气温和高年均降水量这5个因子可以作为选择野菊花优质产区的参考因子。本研究为筛选野菊花适宜产区及人工栽培体系建立提供了参考依据。
关键词野菊花;蒙花苷;气候因子;灰色关联度;Pearson相关分析
野菊花为菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的干燥头状花序，秋、冬二季花初开时采摘、晒干，或蒸后晒干;其性微寒，味苦、辛，归肝、心经，功能清热解毒、泻火平肝，主治疔疮痈肿、目赤肿痛、头痛眩晕[1]。野菊花主要含有黄酮类、萜类和挥发油类成分。研究表明，野菊花中的黄酮类成分具有抗炎免疫、肝保护、抗肿瘤、保护心血管系统、抗菌等多种药理作用[2-4]，野菊花挥发油具有抗微生物、抗氧化、肝保护、降压等作用[5-7]。
在自然条件下，植物生长发育、器官形成及次生代谢产物积累与生态因子密切相关。气候因子能直接或间接影响药用植物的生长、发育、生殖、行为和分布[8]。光、温、水、气等生长环境的差异是引起药用植物次生代谢产物含量差异的重要因素，它们能够通过单一或相互作用影响药用植物品质。不同的气候条件影响药材形状及质量，气候因子在年内分布的不均匀性对植物次生代谢产物积累具有重要影响。
探究生态因子与野菊花有效成分之间的相互关系，可以为药材生产适宜区划、规范化生产提供一定的理论依据。灰色关联度分析(grayrelationalanalysis)依据各因素数列曲线形状的接近程度做发展态势的分析，基于灰色系统的灰色过程，进行因素间时间序列的比较，以确定主导因素，是一种动态过程的研究。在系统发展过程中，如果两个因素同步变化程度较高，则可以认为两者关联度较大;反之，两者关联度较小。灰色关联度分析对于一个系统发展变化态势提供了量化的度量，故经常将其运用于中药材品质与生态因子之间的关联分析。1材料
1.1仪器液相色谱为美国AgilentTechnologies公司Agilent1100CompactLC(G1316A);Milli-Q超纯水系统;KQ-250E型超声波清洗器。
1.2试药甲醇为色谱纯;蒙花苷(纯度≥98%，批号J31M8T36960)购自源叶生物科技有限公司。
13样品野菊花样品采集于湖北、安徽、河南、陕西和山西5省的部分县域的野生样品，经南京农业业大学郭巧生教授鉴定为菊科植物野菊Ch.indicum的头状花序。每个样地设置3个2m×2m的样方，每个样方内采集其中开放程度一致的头状花序(即舌状花开放100%，管状花开放50%)作为一个生物学重复;采集的鲜样于105℃杀青2min后置45℃烘箱中干燥，粉碎过60目筛，-20℃保存。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为ZORBAXSB-AqC18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸(26:23:1)，检测波长为334nm，柱温为室温，流速为1.0mL·min-1，理论板数按蒙花苷峰计算应不低于3000。
2.2蒙花苷对照品溶液的制备取蒙花苷10.0mg加甲醇溶解于50mL棕色量瓶中制成200.0μg·mL-1对照品母液，再精密吸取5.0mL母液用甲醇稀释并定容于25mL棕色量瓶中，得到浓度为40.0μg·mL-1的蒙花苷对照品溶液。
2.3蒙花苷供试品溶液制备取本品粉末(过3号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100mL，称定质量，超声提取40min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。待测液过0.45μm的微孔滤膜，按2.1项下色谱条件进行测定。
2.4线性关系考察分别精密吸取浓度为40.0μg·mL-1的蒙花苷对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0μL注入高效液相色谱仪，以蒙花苷含量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)做标准曲线为Y=1748.7X(R2=0.9997)，结果表明在0.2～1.2μg与峰面积呈良好线性关系。
2.5精密度试验取上述40.0μg·mL-1的蒙花苷对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果显示蒙花苷峰面积的RSD为2.3%。
2.6重复性试验取麻城市野菊花样品6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算蒙花苷含量为12.8mg·g-1，RSD为3.3%。
2.7稳定性试验取麻城市野菊花样品，按2.3项下方法制备供试品溶液，室温下放置，分别在0、2、4、8、12h测定，记录峰面积，结果蒙花苷峰面积的RSD为3.0%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.8加样回收率试验取已知蒙花苷含量的麻城市野菊花样品6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别用移液枪精密加入0.2mL40.0μg·mL-1的蒙花苷标准品溶液，混合均匀，记录峰面积，计算蒙花苷的平均回收率为104.2%，RSD为2.0%，表明该方法的准确度良好。
2.9不同产地气候因子信息及野菊花中蒙花苷含量
不同产地气候因子信息来源于当地气象局提供的5年内均值。不同产地气候因子信息及根据2.1～2.3项下方法测定的野菊花中蒙花苷含量。此次调研的野菊花分布于106°28′22″—118°34′25″，29°46′22—35°23′13″的安徽、河南、湖北、山西、陕西五省，野生资源分布范围广泛。产地年均气温11.5～17.0℃，全年无霜期146～283d，年均日照时数1478～2571h，年均降水量440～1812mm，野菊花蒙花苷0.1～25.3mg·g-1。
不同产地气候因子和蒙花苷含量都有很大差异。2.10野菊花蒙花苷含量产地分布特征《中国药典》2020年版“野菊花”项下含测指标为蒙花苷不得低于8.0mg·g-1。安徽省的28个产地中有14个产地野菊花蒙花苷含量达标，达标率为50.0%，质量分数为8.0～16.4mg·g-1，霍邱县的野菊花蒙花苷质量分数最高达到16.4mg·g-1，为药典标准的2.1倍。
河南省的14个产地中仅有平舆县和郸城县蒙花苷含量达标，质量分数为9.0、11.5mg·g-1，达标率仅14.3%。湖北省的12个产地中蒙花苷含量达标的为9个产地，质量分数为10.1～14.0mg·g-1，达标率为75.0%，红安县和武穴市野菊花蒙花苷质量分数为14.0mg·g-1，为药典标准的1.8倍。山西省的4个产地中仅有阳城县蒙花苷含量达标，质量分数为10.4mg·g-1。
陕西省22个产地中仅有佛坪县、石泉县两地蒙花苷含量达标，达标率为9.1%，质量分数分别为19.5、25.3mg·g-1，为药典标准的2.4、3.2倍，其他产地蒙花苷含量则显著低于药典标准。在地理区域划分上可以发现，在安徽、河南、湖北三省交界的大别山区域如宿松县、霍山县、望江县、大悟县、蕲春县、麻城县、罗田县等地的野菊花蒙花苷含量较高，而山西、陕西两省大多数产地野菊花蒙花苷含量均较低，印证了大别山地区长期以来作为野菊花优质主产区的合理性。
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3讨论
3.1不同产地野菊花蒙花苷含量差异
野菊花蒙花苷为次生代谢产物，其含量积累受多种因素的调控。本研究中野菊花样品来自野外调研，采自当年生植株，采收标准和加工方法一致，采收时间因各产地地理、气候因子而异。此外，产地和种群造成的遗传背景差异是研究不同产地野生中药材有效成分差异不可消除的因素。因此，本研究在可控范围内尽量保持样品一致性，对来自安徽、河南、湖北、山西、陕西5个省份的80个野菊花产地的蒙花苷含量进行测定，发现80个产地总体上蒙花苷含量差异显著，质量分数范围从0.1mg·g-1到25.3mg·g-1，并且在各省内不同产地间含量差异也很大。按照《中国药典》2020年版“野菊花”项下蒙花苷含测不得低于8.0mg·g-1的指标，总体上以安徽、湖北两省内的产地合格率相对其他三省高，尤其是大别山地区的大部分县域野菊花中蒙花苷均能达到药典标准，质量分数为8.0～16.4mg·g-1，符合将大别山地区作为野菊花优质主产区的传统认知。
3.2药用植物次生代谢产物积累影响因素
植物的次生代谢产物及其含量是评价药材品质的重要指标，其合成和积累除受自身遗传特性决定外，很大程度上受生长环境、气候、土壤等因素的直接或间接影响[9]。在经纬度等地理因子，光照、温度、水分等气候因子和土壤肥力、微生物等因子的综合作用下，植物的生长发育过程受到调节。研究表明，日照时数、海拔和年降水量是影响羌活化学成分累积的主要因素[10];温度对人参皂苷活性成分的累积起主要作用[11];无霜期、年极高温度、年均温和年日照是影响丹参有效成分丹参酮和丹酚酸含量的主导气候因子[12]。因此，深入探讨生态因子对药用植物次生代谢产物的影响，对于提高药材质量及药用植物生产规范化、现代化、规模化具有重要意义。
[参考文献]
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作者：1魏民1,2，张亚静1，汪涛1，郭巧生1，邹庆军1，陈芙蓉1，康志欣1，韩慧杰1，韩正洲2，刘晖晖2
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《野菊花蒙花苷含量与其产地气候因子相关性分析》