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腐败餐厨油污纸屑上DNA检验1例

发布时间:2021-06-21 17:25所属平台:学报论文发表咨询网浏览:

接触类生物检材因其DNA含量少、污染严重、PCR抑制物多、DNA检验成功率低一直是法医DNA检验的难点之一[1,2]。特别是餐厨纸屑等非常规接触类生物检材,在气温较高,气候潮湿的环境极易腐败。本文通过对腐败餐厨油污纸屑的DNA检验,得到一男性常染色体和Y染色体

  接触类生物检材因其DNA含量少、污染严重、PCR抑制物多、DNA检验成功率低一直是法医DNA检验的难点之一[1,2]。特别是餐厨纸屑等非常规接触类生物检材,在气温较高,气候潮湿的环境极易腐败。本文通过对腐败餐厨油污纸屑的DNA检验,得到一男性常染色体和Y染色体DNA结果,经数据比对分析,锁定犯罪嫌疑人,成功助破尘封21年之久命案。

刑事技术

  1案例资料

  某日,某镇一单位临时职工因恋爱纠纷,将其女友残忍砍杀后潜逃。因当年勘查手段有限,未得到有效嫌疑人基因分型。经工作勘查,实验室仅提取到疑似嫌疑人母亲DNA及疑似其家系男性Y染色体DNA入库,因未比中嫌疑人DNA信息,案件一直未破。近日,侦查人员发现疑似嫌疑人用过的含餐厨油污且腐败发霉垃圾纸屑,送本实验室进行检验比对。

  2检验方法

  2.1DNA提取

  将垃圾纸屑尽量去除污水浸染霉变部分,含红色餐厨油污部分留用,用镊子铺平,自然风干后,260nm紫外照射纸屑正反两面各20min,灭菌处理。分别取三份标记为样品甲、乙、丙,加入2000套管中,加裂解液ATL480,PK(10mg/ml)20,裂解温度56℃,三份样品裂解时间依次设为1h、1.5h、2h;裂解产物放漩涡震荡仪,转数为11000rpm,离心5min,去载体;加等体积酚-氯仿有机溶剂抽提,13000rpm,离心5min,取上清液,采用QIAcube全自动核酸纯化仪提取DNA,洗脱体积设为30,产物用于扩增。

  2.2PCR扩增和电泳检测分析

  实验用扩增仪为LifetechProflex2*96型PCR仪(美国ABI公司),扩增体系总体积10,常染色体扩增试剂为Verifiler™Plus试剂盒(美国ABI公司),模板DNA7,PrimerSet1,MasterMix2,扩增循环数为29个循环。Y染色体扩增试剂为Yfiler®-plus试剂盒(美国ABI公司),模板DNA4,PrimerSet4,MasterMix2,扩增循环数为30个循环。扩增产物采用LifetechABI3500XL型遗传分析仪(美国ABI公司)电泳分析,以GeneMapperID-Xv1.4软件进行数据处理。

  2.3检验结果

  不同裂解时间常染色体DNA检验结果。采用QIAcube全自动核酸纯化仪及其配套裂解试剂,按照仪器配套标准提取条件方法,裂解时间为1h,样品甲未检出全部STR基因分型,且分型混合,RFU值较低;裂解时间为1.5h,样品乙未检出全部STR基因分型,小片段获得完整分型,大片段基因座出现了不同程度等位基因丢失的现象,个别分型混合;裂解时间为2h,样品丙获得完整纯基因分型。

  经数据库比对,样品丙的常染色体DNA与疑似嫌疑人母亲DNA分型结果单亲遗传关系不排除;样品丙的Y染色体DNA与疑似嫌疑人家系男性Y染色体DNA分型结果一致。由于Y染色体非重组区父系遗传特点,在父系亲缘关系鉴定和家系溯源中具有重要意义[3],办案单位结合这一系列DNA结果,成功确认嫌疑人身份,案件得以告破。

  3讨论

  腐败餐厨油污纸屑属降解检材,可带载体充分收集脱落细胞,因存在大量PCR抑制物,获取纯度和浓度较高的DNA模板是检验成功的关键。腐败餐厨油污种类繁杂,不仅含油脂类,还可能包括食物腐败产生的腐植酸、复杂多糖、血红素、黑色素、蛋白质、钙离子、乙醇等多种PCR抑制物。纸屑属于渗透性载体,前处理不宜用水洗等破坏载体内细胞的方法,而要选择能有效去除油污影响,提取到渗透纸屑内的人体脱落细胞DNA的方法,因此,提取前处理显得尤为重要。纸屑表面细菌等微生物分泌的物质如核酸酶等能降解样品中的人类DNA[4],本实验首先在保持载体完整性,不破坏纸屑表面的人体脱落细胞的情况下,用短波长紫外线照射纸屑两面,起到杀菌效果。

  因存在餐厨油污包裹,人体脱落细胞不易从油污中分离,从样品甲和样品乙裂解时间分别为1h和1.5h的检验结果可以看出,裂解时间短,不易检出全部STR基因分型,大片段基因座会出现了不同程度等位基因丢失的现象,RFU值较低,个别分型混合。

  医学技术论文范例:玻璃化法冻存组织样本的研究进展

  适当延长裂解时间,如样品丙,当裂解时间为2h时,常染色体和Y染色体均获得完整纯基因分型,说明此时检材已充分消化,联合使用有机溶剂抽提,全自动纯化仪提取,使人体脱落细胞尽可能从油脂包裹中分离开,促进DNA从细胞中释放,更益于获得大片段DNA,从而提高DNA模板纯度,确保获得更完整的DNA基因分型结果。本实验尽管扩增体系仅为10,但常染色体DNA提取使用大模版量7,也有效保证了提取完整的基因分型结果。这与黄艳梅等[5]提出的增加模板DNA输入体积,从而提高STR遗传标记的正确分型结论一致。

  参考文献:

  [1]张广峰,陈松,凃政,等.接触DNA检验成功率的影响因素探讨[J].刑事技术,2013(3):9-13.

  [2]袁家龙,袁红,赵春鹤,等.67例皮肤接触样本的采集及DNA提取方法[J].中国法医学杂志,2012,(2):143-144.

  [3]杨成文,魏金叶,罗莉静,等.39个Y-STR基因座复合扩增体系的建立及其在法医学上的应用[J].中国法医学杂志,2019,34(6):567-574.

  [4]郑秀芬.法医DNA分析[M].北京:中国人民公安大学出版社,2002:29.

  [5]黄艳梅,王萌鸽,赵兴春.接触DNA在法医实践中的应用研究进展[J].中国法医学杂志,2016,31(2):151-154.

  作者:姚伟静1,林馨2,张玥1,范英南1

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《腐败餐厨油污纸屑上DNA检验1例》

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