腐败餐厨油污纸屑上DNA检验1例

发布时间：2021-06-21 17:25所属平台：学报论文发表咨询网浏览： 次

接触类生物检材因其DNA含量少、污染严重、PCR抑制物多、DNA检验成功率低一直是法医DNA检验的难点之一[1,2]。特别是餐厨纸屑等非常规接触类生物检材，在气温较高，气候潮湿的环境极易腐败。本文通过对腐败餐厨油污纸屑的DNA检验，得到一男性常染色体和Y染色体

　　接触类生物检材因其DNA含量少、污染严重、PCR抑制物多、DNA检验成功率低一直是法医DNA检验的难点之一[1,2]。特别是餐厨纸屑等非常规接触类生物检材，在气温较高，气候潮湿的环境极易腐败。本文通过对腐败餐厨油污纸屑的DNA检验，得到一男性常染色体和Y染色体DNA结果，经数据比对分析，锁定犯罪嫌疑人，成功助破尘封21年之久命案。

　　1案例资料

　　某日，某镇一单位临时职工因恋爱纠纷，将其女友残忍砍杀后潜逃。因当年勘查手段有限，未得到有效嫌疑人基因分型。经工作勘查，实验室仅提取到疑似嫌疑人母亲DNA及疑似其家系男性Y染色体DNA入库，因未比中嫌疑人DNA信息，案件一直未破。近日，侦查人员发现疑似嫌疑人用过的含餐厨油污且腐败发霉垃圾纸屑，送本实验室进行检验比对。

　　2检验方法

　　2.1DNA提取

　　将垃圾纸屑尽量去除污水浸染霉变部分，含红色餐厨油污部分留用，用镊子铺平，自然风干后，260nm紫外照射纸屑正反两面各20min，灭菌处理。分别取三份标记为样品甲、乙、丙，加入2000套管中，加裂解液ATL480，PK(10mg/ml)20，裂解温度56℃，三份样品裂解时间依次设为1h、1.5h、2h;裂解产物放漩涡震荡仪，转数为11000rpm，离心5min，去载体;加等体积酚-氯仿有机溶剂抽提，13000rpm，离心5min，取上清液，采用QIAcube全自动核酸纯化仪提取DNA，洗脱体积设为30，产物用于扩增。

　　2.2PCR扩增和电泳检测分析

　　实验用扩增仪为LifetechProflex2*96型PCR仪(美国ABI公司)，扩增体系总体积10，常染色体扩增试剂为Verifiler™Plus试剂盒(美国ABI公司)，模板DNA7，PrimerSet1，MasterMix2，扩增循环数为29个循环。Y染色体扩增试剂为Yfiler®-plus试剂盒(美国ABI公司)，模板DNA4，PrimerSet4，MasterMix2，扩增循环数为30个循环。扩增产物采用LifetechABI3500XL型遗传分析仪(美国ABI公司)电泳分析，以GeneMapperID-Xv1.4软件进行数据处理。

　　2.3检验结果

　　不同裂解时间常染色体DNA检验结果。采用QIAcube全自动核酸纯化仪及其配套裂解试剂，按照仪器配套标准提取条件方法，裂解时间为1h，样品甲未检出全部STR基因分型，且分型混合，RFU值较低;裂解时间为1.5h，样品乙未检出全部STR基因分型，小片段获得完整分型，大片段基因座出现了不同程度等位基因丢失的现象，个别分型混合;裂解时间为2h，样品丙获得完整纯基因分型。

　　经数据库比对，样品丙的常染色体DNA与疑似嫌疑人母亲DNA分型结果单亲遗传关系不排除;样品丙的Y染色体DNA与疑似嫌疑人家系男性Y染色体DNA分型结果一致。由于Y染色体非重组区父系遗传特点，在父系亲缘关系鉴定和家系溯源中具有重要意义[3]，办案单位结合这一系列DNA结果，成功确认嫌疑人身份，案件得以告破。

　　3讨论

　　腐败餐厨油污纸屑属降解检材，可带载体充分收集脱落细胞，因存在大量PCR抑制物，获取纯度和浓度较高的DNA模板是检验成功的关键。腐败餐厨油污种类繁杂，不仅含油脂类，还可能包括食物腐败产生的腐植酸、复杂多糖、血红素、黑色素、蛋白质、钙离子、乙醇等多种PCR抑制物。纸屑属于渗透性载体，前处理不宜用水洗等破坏载体内细胞的方法，而要选择能有效去除油污影响，提取到渗透纸屑内的人体脱落细胞DNA的方法，因此，提取前处理显得尤为重要。纸屑表面细菌等微生物分泌的物质如核酸酶等能降解样品中的人类DNA[4]，本实验首先在保持载体完整性，不破坏纸屑表面的人体脱落细胞的情况下，用短波长紫外线照射纸屑两面，起到杀菌效果。

　　因存在餐厨油污包裹，人体脱落细胞不易从油污中分离，从样品甲和样品乙裂解时间分别为1h和1.5h的检验结果可以看出，裂解时间短，不易检出全部STR基因分型，大片段基因座会出现了不同程度等位基因丢失的现象，RFU值较低，个别分型混合。

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　　适当延长裂解时间，如样品丙，当裂解时间为2h时，常染色体和Y染色体均获得完整纯基因分型，说明此时检材已充分消化，联合使用有机溶剂抽提，全自动纯化仪提取，使人体脱落细胞尽可能从油脂包裹中分离开，促进DNA从细胞中释放，更益于获得大片段DNA，从而提高DNA模板纯度，确保获得更完整的DNA基因分型结果。本实验尽管扩增体系仅为10，但常染色体DNA提取使用大模版量7，也有效保证了提取完整的基因分型结果。这与黄艳梅等[5]提出的增加模板DNA输入体积，从而提高STR遗传标记的正确分型结论一致。

　　参考文献：

　　[1]张广峰，陈松，凃政，等.接触DNA检验成功率的影响因素探讨[J].刑事技术，2013(3):9-13.

　　[2]袁家龙，袁红，赵春鹤，等.67例皮肤接触样本的采集及DNA提取方法[J].中国法医学杂志，2012,(2):143-144.

　　[3]杨成文，魏金叶，罗莉静，等.39个Y-STR基因座复合扩增体系的建立及其在法医学上的应用[J].中国法医学杂志，2019,34(6):567-574.

　　[4]郑秀芬.法医DNA分析[M].北京：中国人民公安大学出版社，2002:29.

　　[5]黄艳梅，王萌鸽，赵兴春.接触DNA在法医实践中的应用研究进展[J].中国法医学杂志，2016,31(2):151-154.

　　作者：姚伟静1，林馨2，张玥1，范英南1

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